回收20立方優(yōu)尼克環(huán)氧乙烷滅菌柜

操作程序

(1) 根據(jù)試驗(yàn)要求，制備枯草桿菌黑色變種芽孢懸液和菌片。菌片放入雙層聚乙烯塑料袋內(nèi)密封包裝，每袋2片。每次試驗(yàn)用20袋。

(2) 將滅菌器上、中、下3層，每層內(nèi)、中、外各設(shè)一點(diǎn)，共設(shè)9點(diǎn)。每點(diǎn)物品中間布放1袋，共需18袋試驗(yàn)菌片。另將一袋（2片）菌片放置在室溫條件下作為陽(yáng)性對(duì)照。

(3) 按使用說(shuō)明書(shū)所規(guī)定的環(huán)氧乙烷濃度、作用時(shí)間、柜內(nèi)的溫度和相對(duì)濕度，在滿(mǎn)載條件下進(jìn)行環(huán)氧乙烷滅菌處理。滿(mǎn)載用物品，隨滅菌器用途而定。處理完畢，取出菌片，分別移種于5 ml 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，7d后觀察最終結(jié)果(定性培養(yǎng)檢測(cè))。

對(duì)難以判斷結(jié)果的營(yíng)養(yǎng)肉湯管，取其中0.2ml懸液接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，用無(wú)菌L棒涂抹均勻，置37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。48h后涂片染色，顯微鏡下觀察菌落形態(tài)，或進(jìn)一步做其他試驗(yàn)，判斷有無(wú)生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的是否為試驗(yàn)菌。若為非試驗(yàn)菌，則應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。

(4) 測(cè)試中，應(yīng)同時(shí)設(shè)立定性和定量陽(yáng)性對(duì)照組與陰性對(duì)照組。

(5) 定量陽(yáng)性對(duì)照組，以同批試驗(yàn)用菌片置室溫下，待消毒或滅菌試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后，立即將該菌片2片分別放入含5.0mlPBS試管中，各振敲打80次。取洗液按2.1.1.3 所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。

(6) 定性陽(yáng)性對(duì)照組，以同批試驗(yàn)用菌片置室溫下，待滅菌試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后，立即將該菌片2 片，分別接種于5.0ml 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，放入溫箱中作定性培養(yǎng)，觀察有細(xì)菌生長(zhǎng)情況。

(7) 陰性對(duì)照組，以同批次試驗(yàn)用未染菌樣片2 片，分別接種于5.0ml 營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，同時(shí)將未接種過(guò)的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng)，觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。

(8) 試驗(yàn)重復(fù)5 次。

(9)在5次試驗(yàn)中，每次試驗(yàn)中的陽(yáng)性對(duì)照菌片，回收菌量均應(yīng)在5×10cfu/片～5×10cfu/片；定性陽(yáng)性對(duì)照組，細(xì)菌生長(zhǎng)良好；陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。陽(yáng)性或陰性對(duì)照若有不符合上述要求的結(jié)果，試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。

評(píng)價(jià)規(guī)定

在5 次滅菌試驗(yàn)中，每次試驗(yàn)中的定量陽(yáng)性對(duì)照組，檢測(cè)回收菌量均達(dá)5 × 10cfu/ 片～5 × 10cfu/ 片；定性陽(yáng)性對(duì)照組，細(xì)菌生長(zhǎng)良好。陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。所有試驗(yàn)菌片全部無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)，可判為滅菌合格。

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